PAS(Periodic Acid-Schiff)糖原染色是一種常用于組織學和病理學領域的染色技術。它通過特定的化學反應,將組織中的糖原著色為紫紅色,從而可以清晰地觀察和評估細胞內(nèi)糖原的分布和含量。本文將介紹PAS糖原染色的原理、實施步驟以及其在醫(yī)學診斷和科學研究中所起到的重要作用。
PAS(Periodic Acid-Schiff)是一種經(jīng)典的組織染色方法,最早由Schiff于1867年發(fā)明。該方法通過氧化劑與堿性條件下還原性物質(zhì)之間產(chǎn)生顯微觀察可見顏色反應來顯示有機物結構。在PAS糖原染色中,主要目標就是觀察和評估組織樣本中存在的糖原含量。
PAS糖原染色主要依賴于兩個關鍵步驟:周期酸氧化和Schiff試劑還原。2.1周期酸氧化:首先,組織樣本被經(jīng)過一定時間的周期酸處理。周期酸(Periodic Acid)能夠選擇性氧化糖原中的羥基,將其轉化為醛基。2.2 Schiff試劑還原:接下來,在周期酸處理后,樣本通過Schiff試劑進行染色。Schiff試劑通常由亞硫酸與伊紅反應而成。它可以還原周期酸氧化產(chǎn)生的醛基,并形成紫紅色沉淀。
PAS糖原染色步驟3.1取得組織樣本:首先,需要取得要進行PAS糖原染色的組織樣本。3.2固定和包埋:將組織樣本固定在適當?shù)墓潭ㄒ褐校⑦M行脫水和包埋。3.3制備切片:使用微型切片機或手工切片方法制備薄切片。3.4染色操作:3.4.1去蠟:將切片浸入去蠟溶液中,去除包埋時所使用的蠟質(zhì)。3.4.2去水和再度水合作用:通過浸入不同濃度乙醇溶液使組織脫水,然后使用去離子水進行再度水合作用。3.4.3周期酸氧化:將切片浸入周期酸溶液中,在適當?shù)臏囟群蜁r間下進行氧化反應。3.4.4再次洗滌:使用去離子水對切片進行洗滌以去除多余的周期酸溶液。3.4.5 Schiff試劑染色:將切片浸入Schiff試劑中,使其與被周期酸氧化的糖原發(fā)生反應形成紫紅色沉淀。3.4.6洗凈和固定:使用流動的自來水沖洗切片,并繼續(xù)在硼酸緩沖液中浸泡一段時間以穩(wěn)定染色結果。